aa2ar_human

NAME

5G53

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

aa2ar_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

                   
TM1              
M
P
I
M
G
S
S
V
Y
I
10
                   
                   
T
V
E
L
A
I
A
V
L
A
20
                   
                   
I
L
G
N
V
L
V
C
W
A
30
                   
        ICL1    
V
W
L
N
S
N
L
Q
N
V
40
                   
TM2              
T
N
Y
F
V
V
S
L
A
A
50
                   
                   
A
D
I
A
V
G
V
L
A
I
60
                   
                   
P
F
A
I
T
I
S
T
G
F
70
                   
ECL1 TM3      
C
A
A
C
H
G
C
L
F
I
80
                   
                   
A
C
F
V
L
V
L
T
Q
S
90
                   
                   
S
I
F
S
L
L
A
I
A
I
100
                   
                   
D
R
Y
I
A
I
R
I
P
L
110
                   
ICL2     TM4  
R
Y
N
G
L
V
T
G
T
R
120
                   
                   
A
K
G
I
I
A
I
C
W
V
130
                   
                   
L
S
F
A
I
G
L
T
P
M
140
                   
    ECL2        
L
G
W
N
N
C
G
Q
P
K
150
     
 
            
                   
E
G
K
N
H
S
Q
G
C
G
160
                   
                   
E
G
Q
V
A
C
L
F
E
D
170
                   
    TM5          
V
V
P
M
N
Y
M
V
Y
F
180
                   
                   
N
F
F
A
C
V
L
V
P
L
190
                   
                   
L
L
M
L
G
V
Y
L
R
I
200
                   
                   
F
L
A
A
R
R
Q
L
K
Q
210
                   
      ICL3      
M
E
S
Q
P
L
P
G
E
R
220
                   
TM6              
A
R
S
T
L
Q
K
E
V
H
230
                   
                   
A
A
K
S
L
A
I
I
V
G
240
                   
                   
L
F
A
L
C
W
L
P
L
H
250
                   
                   
I
I
N
C
F
T
F
F
C
P
260
                   
ECL3   TM7    
D
C
S
H
A
P
L
W
L
M
270
                   
                   
Y
L
A
I
V
L
S
H
T
N
280
                   
                   
S
V
V
N
P
F
I
Y
A
Y
290
                   
  H8              
R
I
R
E
F
R
Q
T
F
R
300
               
 
 
                   
K
I
I
R
S
H
V
L
R
Q
310
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
        C-term
Q
E
P
F
K
A
A
G
T
S
320
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
R
V
L
A
A
H
G
S
D
330
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
G
E
Q
V
S
L
R
L
N
G
340
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
H
P
P
G
V
W
A
N
G
S
350
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
P
H
P
E
R
R
P
N
G
360
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
Y
A
L
G
L
V
S
G
G
S
370
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
Q
E
S
Q
G
N
T
G
L
380
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
D
V
E
L
L
S
H
E
L
390
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
K
G
V
C
P
E
P
P
G
L
400
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
D
D
P
L
A
Q
D
G
A
G
410
 
 
   
V
S
                   
TM1              
M
P
I
M
G
S
S
V
Y
I
10
                   
                   
T
V
E
L
A
I
A
V
L
A
20
                   
                   
I
L
G
N
V
L
V
C
W
A
30
                   
        ICL1    
V
W
L
N
S
N
L
Q
N
V
40
                   
TM2              
T
N
Y
F
V
V
S
L
A
A
50
                   
                   
A
D
I
A
V
G
V
L
A
I
60
                   
                   
P
F
A
I
T
I
S
T
G
F
70
                   
ECL1 TM3      
C
A
A
C
H
G
C
L
F
I
80
                   
                   
A
C
F
V
L
V
L
T
Q
S
90
                   
                   
S
I
F
S
L
L
A
I
A
I
100
                   
                   
D
R
Y
I
A
I
R
I
P
L
110
                   
ICL2     TM4  
R
Y
N
G
L
V
T
G
T
R
120
                   
                   
A
K
G
I
I
A
I
C
W
V
130
                   
                   
L
S
F
A
I
G
L
T
P
M
140
                   
    ECL2        
L
G
W
N
N
C
G
Q
P
K
150
     
 
            
                   
E
G
K
A
H
S
Q
G
C
G
160
                   
                   
E
G
Q
V
A
C
L
F
E
D
170
                   
    TM5          
V
V
P
M
N
Y
M
V
Y
F
180
                   
                   
N
F
F
A
C
V
L
V
P
L
190
                   
                   
L
L
M
L
G
V
Y
L
R
I
200
                   
                   
F
L
A
A
R
R
Q
L
K
Q
210
                   
      ICL3      
M
E
S
Q
P
L
P
G
E
R
220
                   
TM6              
A
R
S
T
L
Q
K
E
V
H
230
                   
                   
A
A
K
S
L
A
I
I
V
G
240
                   
                   
L
F
A
L
C
W
L
P
L
H
250
                   
                   
I
I
N
C
F
T
F
F
C
P
260
                   
ECL3   TM7    
D
C
S
H
A
P
L
W
L
M
270
                   
                   
Y
L
A
I
V
L
S
H
T
N
280
                   
                   
S
V
V
N
P
F
I
Y
A
Y
290
                   
  H8              
R
I
R
E
F
R
Q
T
F
R
300
               
 
                 
K
I
I
R
S
H
V
L
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV proteas
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10)      

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
 
 
ECL2
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
 
 
 
 
 
 
H8
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
C-term

 
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
 
 
ECL2
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
 
H8 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV pr
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10


DIAGRAMS

ICL1 S N L Q ICL1ECL1 F C A ECL1ICL2 P L R Y N G L V ICL2ECL2 W N N C G Q P K E G K N H S Q G C G E G Q V A C L F E D V V ECL2ICL3 Q P L P G ICL3ECL3 P D C S H A ECL3C-term K A A G T S A R V L A A H G S D G E Q V S L R L N G H P P G V W A N G S A P H P E R R P N G Y A L G L V S G G S A Q E S Q G N T G L P D V E L L S H E L K G V C P E P P G L D D P L A Q D G A G V S C-term M P I M G S S V Y I T V E L A I A V L A I L G N V L V C W A V W L N N V T N Y F V V S L A A A D I A V G V L A I P F A I T I S T G A C H G C L F I A C F V L V L T Q S S I F S L L A I A I D R Y I A I R I T G T R A K G I I A I C W V L S F A I G L T P M L G P M N Y M V Y F N F F A C V L V P L L L M L G V Y L R I F L A A R R Q L K Q M E S E R A R S T L Q K E V H A A K S L A I I V G L F A L C W L P L H I I N C F T F F C P L W L M Y L A I V L S H T N S V V N P F I Y A Y R I R E F R K H V L P F F R Q T I I R S R Q Q E

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated
154 |  N A

DELETIONS

  • from 309 to 412

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: tag

    Name: His(10)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_1 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: TEV protease
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_0 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Tni PRO (Trichoplusia ni) cell lines Insect BAC ULTRA system (Oxford Expression Technologies).

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent DM 2.0 %w/v

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Proteolysis by TEV protease None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: vapour diffusion
    TYPE: Sitting drop ()
    PROTEIN CONCENTRATION: 20 mg/ml
    Temperature: 4°C
    ph : 5.7-5.7

    Remarks: Mini-Gs: mutation, L63Y, was included to improve crystal quality + structure in complex with mini-Gs + crystals in presence/absence of CHS showed no major difference and both used to solve the structure.

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Detergent
    lipid OTG 0.35 %w/w
    Additional
    PEG 2000 MME 9.5 %v/v
    NaOAc pH 5.7 0.1 M
    MgCl2 1 mM
    apyrase 0.1 U
    Xtal-Partner
    Mini-Gs 1.2 fold molar excess