calcr_human

NAME

5UZ7

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

calcr_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
N-term        
M
R
F
T
F
T
S
R
C
L
10
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
L
F
L
L
L
N
H
P
T
20
 
 
 
 
            
                   
P
I
L
P
A
F
S
N
Q
T
30
                   
                   
Y
P
T
I
E
P
K
P
F
L
40
                   
                   
Y
V
V
G
R
K
K
M
M
D
50
                   
                   
A
Q
Y
K
C
Y
D
R
M
Q
60
                   
                   
Q
L
P
A
Y
Q
G
E
G
P
70
                   
                   
Y
C
N
R
T
W
D
G
W
L
80
                   
                   
C
W
D
D
T
P
A
G
V
L
90
                   
                   
S
Y
Q
F
C
P
D
Y
F
P
100
                   
                   
D
F
D
P
S
E
K
V
T
K
110
                   
                   
Y
C
D
E
K
G
V
W
F
K
120
                   
                   
H
P
E
N
N
R
T
W
S
N
130
                   
  TM1            
Y
T
M
C
N
A
F
T
P
E
140
                   
                   
K
L
K
N
A
Y
V
L
Y
Y
150
                   
                   
L
A
I
V
G
H
S
L
S
I
160
                   
                   
F
T
L
V
I
S
L
G
I
F
170
                   
      ICL1 TM2
V
F
F
R
S
L
G
C
Q
R
180
                   
                   
V
T
L
H
K
N
M
F
L
T
190
                   
                   
Y
I
L
N
S
M
I
I
I
I
200
                   
          ECL1  
H
L
V
E
V
V
P
N
G
E
210
                   
          TM3    
L
V
R
R
D
P
V
S
C
K
220
                   
                   
I
L
H
F
F
H
Q
Y
M
M
230
                   
                   
A
C
N
Y
F
W
M
L
C
E
240
                   
                   
G
I
Y
L
H
T
L
I
V
V
250
                   
ICL2       TM4
A
V
F
T
E
K
Q
R
L
R
260
                   
                   
W
Y
Y
L
L
G
W
G
F
P
270
                   
                   
L
V
P
T
T
I
H
A
I
T
280
                   
          ECL2  
R
A
V
Y
F
N
D
N
C
W
290
                   
              TM5
L
S
V
E
T
H
L
L
Y
I
300
                   
                   
I
H
G
P
V
M
A
A
L
V
310
                   
                   
V
N
F
F
F
L
L
N
I
V
320
                   
                   
R
V
L
V
T
K
M
R
E
T
330
                   
  ICL3 TM6    
H
E
A
E
S
H
M
Y
L
K
340
                   
                   
A
V
K
A
T
M
I
L
V
P
350
                   
                   
L
L
G
I
Q
F
V
V
F
P
360
                   
  ECL3 TM7    
W
R
P
S
N
K
M
L
G
K
370
                   
                   
I
Y
D
Y
V
M
H
S
L
I
380
                   
                   
H
F
Q
G
F
F
V
A
T
I
390
                   
        H8        
Y
C
F
C
N
N
E
V
Q
T
400
                   
                   
T
V
K
R
Q
W
A
Q
F
K
410
                   
                   
I
Q
W
N
Q
R
W
G
R
R
420
                   
C-term        
P
S
N
R
S
A
R
A
A
A
430
                   
                   
A
A
A
E
A
G
D
I
P
I
440
                   
                   
Y
I
C
H
Q
E
L
R
N
E
450
                   
                   
P
A
N
N
Q
G
E
E
S
A
460
                   
                   
E
I
I
P
L
N
I
I
E
Q
470
       
       
E
S
S
A
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
hemagglutin
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG            
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreScission
 
                  
  N-term      
 
A
F
S
N
Q
T
Y
P
T
33
                   
                   
I
E
P
K
P
F
L
Y
V
V
43
                   
                   
G
R
K
K
M
M
D
A
Q
Y
53
                   
                   
K
C
Y
D
R
M
Q
Q
L
P
63
                   
                   
A
Y
Q
G
E
G
P
Y
C
N
73
                   
                   
R
T
W
D
G
W
L
C
W
D
83
                   
                   
D
T
P
A
G
V
L
S
Y
Q
93
                   
                   
F
C
P
D
Y
F
P
D
F
D
103
                   
                   
P
S
E
K
V
T
K
Y
C
D
113
                   
                   
E
K
G
V
W
F
K
H
P
E
123
                   
                   
N
N
R
T
W
S
N
Y
T
M
133
                   
TM1              
C
N
A
F
T
P
E
K
L
K
143
                   
                   
N
A
Y
V
L
Y
Y
L
A
I
153
                   
                   
V
G
H
S
L
S
I
F
T
L
163
                   
                   
V
I
S
L
G
I
F
V
F
F
173
                   
ICL1 TM2      
R
S
L
G
C
Q
R
V
T
L
183
                   
                   
H
K
N
M
F
L
T
Y
I
L
193
                   
                   
N
S
M
I
I
I
I
H
L
V
203
                   
    ECL1        
E
V
V
P
N
G
E
L
V
R
213
                   
    TM3          
R
D
P
V
S
C
K
I
L
H
223
                   
                   
F
F
H
Q
Y
M
M
A
C
N
233
                   
                   
Y
F
W
M
L
C
E
G
I
Y
243
                   
                   
L
H
T
L
I
V
V
A
V
F
253
                   
ICL2 TM4      
T
E
K
Q
R
L
R
W
Y
Y
263
                   
                   
L
L
G
W
G
F
P
L
V
P
273
                   
                   
T
T
I
H
A
I
T
R
A
V
283
                   
    ECL2        
Y
F
N
D
N
C
W
L
S
V
293
                   
        TM5      
E
T
H
L
L
Y
I
I
H
G
303
                   
                   
P
V
M
A
A
L
V
V
N
F
313
                   
                   
F
F
L
L
N
I
V
R
V
L
323
                   
                   
V
T
K
M
R
E
T
H
E
A
333
                   
TM6              
E
S
H
M
Y
L
K
A
V
K
343
                   
                   
A
T
M
I
L
V
P
L
L
G
353
                   
                   
I
Q
F
V
V
F
P
W
R
P
363
                   
ECL3 TM7      
S
N
K
M
L
G
K
I
Y
D
373
                   
                   
Y
V
M
H
S
L
I
H
F
Q
383
                   
                   
G
F
F
V
A
T
I
Y
C
F
393
                   
  H8              
C
N
N
E
V
Q
T
T
V
K
403
                   
                   
R
Q
W
A
Q
F
K
I
Q
W
413
                   
                   
N
Q
R
W
G
R
R
P
S
N
423
                   
C-term        
R
S
A
R
A
A
A
A
A
A
433
                   
                   
E
A
G
D
I
P
I
Y
I
C
443
                   
                   
H
Q
E
L
R
N
E
P
A
N
453
                   
                   
N
Q
G
E
E
S
A
E
I
I
463
                   
                   
P
L
N
I
I
E
Q
E
S
S
473
 
 
A
474
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreScission
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(8)        

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
 
 
 
 
N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
C-term

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
hemagg
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreSci
 
 
 N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
TM5
 
ICL3
 
TM6
 
ECL3
 
TM7
 
H8
 
C-term
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PreSci
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(8)


DIAGRAMS

ICL1 R S L G ICL1ECL1 V P N G E L V R R D ECL1ICL2 A V F T E K Q ICL2ECL2 N D N C W L S V E T H L ECL2ICL3 E ICL3ECL3 R P S ECL3N-term M R F T F T S R C L A L F L L L N H P T P I L P A F S N Q T Y P T I E P K P F L Y V V G R K K M M D A Q Y K C Y D R M Q Q L P A Y Q G E G P Y C N R T W D G W L C W D D T P A G V L S Y Q F C P D Y F P D F D P S E K V T K Y C D E K G V W F K H P E N N R T W S N Y N-termC-term P S N R S A R A A A A A A E A G D I P I Y I C H Q E L R N E P A N N Q G E E S A E I I P L N I I E Q E S S A C-term T M C N A F T P E K L K N A Y V L Y Y L A I V G H S L S I F T L V I S L G I F V F F C Q R V T L H K N M F L T Y I L N S M I I I I H L V E V P V S C K I L H F F H Q Y M M A C N Y F W M L C E G I Y L H T L I V V R L R W Y Y L L G W G F P L V P T T I H A I T R A V Y F L Y I I H G P V M A A L V V N F F F L L N I V R V L V T K M R E T H A E S H M Y L K A V K A T M I L V P L L G I Q F V V F P W N K M L G K I Y D Y V M H S L I H F Q G F F V A T I Y C F C N N E V K R F K I R W G V Q T T Q W A Q Q W N Q R R

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated

DELETIONS

  • from 1 to 24

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: signal

    Name: hemagglutinin
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_0 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: FLAG
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_1 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: PreScission site(3C)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_2 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: PreScission site(3C)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_3 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: His(8)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: C-term_4 None:None
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Hi5 Insect Complex formation was initiated by addition of 1 μ M salmon calcitonin, Nb35–His (10 μ g ml−1) and Apyrase (25 mU ml−1, NEB); the suspension was incubated for 1 h at room temperature.

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent LMNG 0.5 %(w/v)
    additive CHS 0.03 %(w/v)

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Proteolysis by HRV 3C protease None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: Cryo-EM
    TYPE: Volta phase plate (FEI) ()
    PROTEIN CONCENTRATION: 0.3 mg/ml
    Temperature: cryoTemp(liquid Nitrogen)
    ph : 7.4-7.4

    Remarks: Complex structure of calcitonin receptor and heterotrimeric Gs(aby) subunits

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Detergent
    LMNG 0.01 %(w/v)
    Lipid
    CHS 0.006 %(w/v)
    Additional
    NaCl 100.0 mM
    HEPES pH 7.4 20.0 mM
    MgCl2 2.0 mM
    sCT 100.0 nM