drd4_human

NAME

5WIV

ORGANISM

Human (Homo sapiens)

PROTEIN NAME

drd4_human

SOURCE

SWISSPROT

SEQUENCE

Perspective: Wild-type Construct

                   
N-term        
M
G
N
R
S
T
A
D
A
D
10
                   
                   
G
L
L
A
G
R
G
P
A
A
20
                   
                   
G
A
S
A
G
A
S
A
G
L
30
                   
TM1              
A
G
Q
G
A
A
A
L
V
G
40
                   
                   
G
V
L
L
I
G
A
V
L
A
50
                   
                   
G
N
S
L
V
C
V
S
V
A
60
                   
    ICL1 TM2  
T
E
R
A
L
Q
T
P
T
N
70
                   
                   
S
F
I
V
S
L
A
A
A
D
80
                   
                   
L
L
L
A
L
L
V
L
P
L
90
                   
                   
F
V
Y
S
E
V
Q
G
G
A
100
                   
ECL1 TM3      
W
L
L
S
P
R
L
C
D
A
110
                   
                   
L
M
A
M
D
V
M
L
C
T
120
                   
                   
A
S
I
F
N
L
C
A
I
S
130
                   
                   
V
D
R
F
V
A
V
A
V
P
140
                   
ICL2       TM4
L
R
Y
N
R
Q
G
G
S
R
150
                   
                   
R
Q
L
L
L
I
G
A
T
W
160
                   
                   
L
L
S
A
A
V
A
A
P
V
170
                   
      ECL2      
L
C
G
L
N
D
V
R
G
R
180
                   
                   
D
P
A
V
C
R
L
E
D
R
190
                   
TM5              
D
Y
V
V
Y
S
S
V
C
S
200
                   
                   
F
F
L
P
C
P
L
M
L
L
210
                   
                   
L
Y
W
A
T
F
R
G
L
Q
220
               
 
 
                   
R
W
E
V
A
R
R
A
K
L
230
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ICL3            
H
G
R
A
P
R
R
P
S
G
240
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
G
P
P
S
P
T
P
P
A
250
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
R
L
P
Q
D
P
C
G
P
260
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
D
C
A
P
P
A
P
G
L
P
270
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
R
G
P
C
G
P
D
C
A
P
280
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
A
P
S
L
P
Q
D
P
C
290
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
G
P
D
C
A
P
P
A
P
G
300
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
L
P
P
D
P
C
G
S
N
C
310
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
A
P
P
D
A
V
R
A
A
A
320
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
L
P
P
Q
T
P
P
Q
T
R
330
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
        TM6      
R
R
R
R
A
K
I
T
G
R
340
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
E
R
K
A
M
R
V
L
P
V
350
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
V
V
G
A
F
L
L
C
W
T
360
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   
P
F
F
V
V
H
I
T
Q
A
370
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
    ECL3   TM7
L
C
P
A
C
S
V
P
P
R
380
 
 
                
                   
L
V
S
A
V
T
W
L
G
Y
390
                   
                   
V
N
S
A
L
N
P
V
I
Y
400
                   
      H8          
T
V
F
N
A
E
F
R
N
V
410
                 
                 
F
R
K
A
L
R
A
C
C
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
hemagglutin
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG            
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10)      
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV proteas
                   
N-term        
M
G
N
R
S
T
A
D
A
D
10
                   
                   
G
L
L
A
G
R
G
P
A
A
20
                   
                   
G
A
S
A
G
A
S
A
G
L
30
                   
TM1              
A
G
Q
G
A
A
A
L
V
G
40
                   
                   
G
V
L
L
I
G
A
V
L
A
50
                   
                   
G
N
S
L
V
C
V
S
V
A
60
                   
    ICL1 TM2  
T
E
R
A
L
Q
T
P
T
N
70
                   
                   
S
F
I
V
S
L
A
A
A
D
80
                   
                   
L
L
L
A
L
L
V
L
P
L
90
                   
                   
F
V
Y
S
E
V
Q
G
G
A
100
                   
ECL1 TM3      
W
L
L
S
P
R
L
C
D
A
110
                   
                   
L
M
A
M
D
V
M
L
C
T
120
                   
                   
A
S
I
F
N
L
C
A
I
S
130
                   
                   
V
D
R
F
V
A
V
A
V
P
140
                   
ICL2       TM4
L
R
Y
N
R
Q
G
G
S
R
150
                   
                   
R
Q
L
L
L
I
G
A
T
W
160
                   
                   
L
L
S
A
A
V
A
A
P
V
170
                   
      ECL2      
L
C
G
L
N
D
V
R
G
R
180
                   
                   
D
P
A
V
C
R
L
E
D
R
190
                   
TM5              
D
Y
V
V
Y
S
S
V
C
S
200
                   
                   
F
F
L
P
C
P
L
M
L
L
210
                   
                   
L
Y
W
A
T
F
R
G
L
Q
220
               
 
                 
R
W
E
V
A
R
R
A
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
BRIL (b562R
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                 
TM7            
S
A
V
T
W
L
G
Y
V
391
                   
                   
N
S
A
L
N
P
V
I
Y
T
401
                   
    H8            
V
F
N
A
E
F
R
N
V
F
411
               
               
R
K
A
L
R
A
C
C
419

SCHEMATIC

Perspective: Wild-type Construct

 
N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
TM5
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ICL3
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TM6
 
 
 
 
 
ECL3
 
 
 
 
 
TM7
 
H8
 
C-term

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
hemagg
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
FLAG
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
His(10
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TEV pr
 
N-term
 
TM1
 
ICL1
 
TM2
 
ECL1
 
TM3
 
ICL2
 
TM4
 
ECL2
 
 
TM5 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
BRIL (
 
  
 
TM7
 
H8
 
C-term


DIAGRAMS

ICL1 R A L Q ICL1ECL1 G A W L L ECL1ICL2 P L R Y N R Q G ICL2ECL2 L N D V R G R D P A V C R L E ECL2ICL3 L H G R A P R R P S G P G P P S P T P P A P R L P Q D P C G P D C A P P A P G L P R G P C G P D C A P A A P S L P Q D P C G P D C A P P A P G L P P D P C G S N C A P P D A V R A A A L P P Q T P P Q T R R R R R ICL3ECL3 P A C S V ECL3N-term M G N R S T A D A D G L L A G R G P A A G A S A G A S A G L N-termC-term A C C C-term A G Q G A A A L V G G V L L I G A V L A G N S L V C V S V A T E T P T N S F I V S L A A A D L L L A L L V L P L F V Y S E V Q G S P R L C D A L M A M D V M L C T A S I F N L C A I S V D R F V A V A V G S R R Q L L L I G A T W L L S A A V A A P V L C G D R D Y V V Y S S V C S F F L P C P L M L L L Y W A T F R G L Q R W E V A R R A K A K I T G R E R K A M R V L P V V V G A F L L C W T P F F V V H I T Q A L C P P R L V S A V T W L G Y V N S A L N P V I Y T V F N A E F R K F R N V A L R

MUTATIONS

Position Wild-type Mutated

DELETIONS

  • from 229 to 382

    • MODIFICATIONS


    AUXILIARY PROTEINS

    Protein_type: signal

    Name: hemagglutinin
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_0 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: FLAG
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_1 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: tag

    Name: His(10)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_2 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: prot_cleavage

    Name: TEV protease
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: N-term_3 None:None
    Presence in Crystal:NO
    Remarks: None

    Protein_type: fusion

    Name: BRIL (b562RIL)
    Sequence: None
    Deletions:
    Positions: Within Receptor_4 229:382
    Presence in Crystal:YES
    Remarks: None

    EXPRESSION

    Expression method Host cell type Host cell Remarks
    Baculovirus Sf9 Insect

    SOLUBILIZATION

    Solvent type Item Concentration
    detergent DDM 1.0 %w/v
    additive CHS 0.2 %w/v

    Remarks:

    PURIFICATION

    Purification type Description
    Proteolysis by TEV protease None
    Deglycosylation by PNGase F None

    Remarks:None

    CRYSTALLIZATION

    METHOD: in meso/LCP
    TYPE: lipidic cubic phase (LCP) (monoolein (9.9 MAG))
    PROTEIN CONCENTRATION: 60.0 mg/ml
    Temperature: 20°C
    ph : 5.9-6.2

    Remarks: (LCP) by mixing 40% of ~60 mg/ml with 60% lipid (10%(w/w)cholesterol, 90%(w/w)monoolein) using the twin-syringemethod

    Chemical lists

    Type Item Concentration
    Detergent
    Detergent DDM 0.05 %v/v
    Lipid
    Lipid CHS 0.01 %v/v
    Additional
    PEG400 34.0 %v/v
    Tris/HCl pH 5.9-6.2 100.0 mM
    ammonium phosphate dibasic 100-140 mM
    sodium chloride 180-200 mM